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ibidi解決方案|細(xì)胞培養(yǎng)及成像樣品制備等實(shí)驗(yàn)方案的關(guān)鍵問題是什么?

date:2023-09-14 14:04:03

 

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  周密的實(shí)驗(yàn)設(shè)置方案,以及成像前對細(xì)胞的優(yōu)化、可重復(fù)的處理,是顯微鏡實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。為此,必須考慮幾個因素,這些因素取決于顯微鏡方法和所使用的一般設(shè)置:

  

  • 容器幾何形狀

  

  • 基材、表面和涂層

  

  • 無菌和可繁殖細(xì)胞處理

  

  • 活細(xì)胞和健康細(xì)胞

  

  • 滿足顯微鏡的光學(xué)要求

  

  • 可選:滿足活細(xì)胞成像要求

  

  實(shí)驗(yàn)方案的關(guān)鍵問題是什么?

  

  如何為您的實(shí)驗(yàn)和顯微鏡技術(shù)選擇最佳幾何形狀的實(shí)驗(yàn)器皿?

  

  存在多種細(xì)胞培養(yǎng)容器以滿足不同細(xì)胞培養(yǎng)測定的復(fù)雜性,例如使用懸浮或粘附細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)、2D或3D測定、單培養(yǎng)或共培養(yǎng)測定等等。主要培養(yǎng)容器的幾何形狀(如生長面積和體積)是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果和解釋的重要因素,在開始之前應(yīng)仔細(xì)考慮。此外,容器幾何形狀影響實(shí)驗(yàn)中的物理(例如蒸發(fā))和光學(xué)(例如彎液面效應(yīng))特性。

  

  ibidi的解決方案

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  ibidi提供各種幾何形狀的成像小室,專門為您的實(shí)驗(yàn)量身定制。了解

  

  更多詳情請點(diǎn)擊查看“The Geometry of the ibidi Chambers”.

  

  您為您的特定細(xì)胞類型和顯微鏡方法選擇了合適的基底、表面和涂層了嗎?

  

  細(xì)胞的培養(yǎng)、生長、發(fā)育和信號傳導(dǎo)強(qiáng)烈依賴于用于細(xì)胞培養(yǎng)的表面。此外,光學(xué)規(guī)格要求強(qiáng)烈決定了哪種基底是可取的。硼硅酸鹽玻璃被廣泛用作基底,然而,涂層可能是支持細(xì)胞粘附所必需的。聚合物的使用也非常普遍。它們通常經(jīng)過組織培養(yǎng)處理,使得細(xì)胞能直接粘附;然而,并非市場上所有可用的聚合物都適用于顯微鏡。ibidi Polymer Coverslip聚合物塑料底部的實(shí)驗(yàn)器皿為各種高分辨率顯微鏡應(yīng)用提供了最優(yōu)的光學(xué)性能。

 

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  然而,如果細(xì)胞表面需要特定的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM),則可以使用涂層,例如膠原I、膠原IV或聚-L-賴氨酸。對于懸浮細(xì)胞或球體培養(yǎng),則應(yīng)使用非粘附表面,如ibidi Bioinert生物惰性表面。

  

  此外,還需要考慮是進(jìn)行2D還是3D實(shí)驗(yàn)。有關(guān)更多詳細(xì)信息,請點(diǎn)擊查看3D Cell Culture Assays。

  

  ibidi的解決方案

  

  ibidi Labware耗材

  

  ibidi µ-Slides, µ-Dishes, and µ-Plates的突出特點(diǎn)是其超薄的蓋玻片底部,非常適合高端顯微鏡應(yīng)用。ibidi提供 ibidi Polymer Coverslip聚合物塑料底和ibidi Glass Coverslip玻璃底的實(shí)驗(yàn)器皿;也提供具有各種表面和涂層的成像小室,例如用于直接培養(yǎng)貼壁細(xì)胞的ibiTreat (tissue culture-treated) ibiTreat(組織培養(yǎng)處理的)表面。有關(guān)更多詳細(xì)信息,請點(diǎn)擊查看“Surfaces and Coatings”。

  

  Non-Adherent Bioinert Surface非貼壁生物惰性表面

  

  生物惰性是一種穩(wěn)定、生物惰性的表面,用于在沒有任何細(xì)胞或生物分子粘附的非粘附表面上對類器官、球體和懸浮細(xì)胞進(jìn)行長期培養(yǎng)和高分辨率顯微鏡觀察。目前有 µ-Dish 35mm, high Bioinert。

 

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  Micropatterning微圖案

  

  ibidi µ-Patterning technology實(shí)現(xiàn)了各種2D和3D細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用的空間定義的細(xì)胞粘附。小型化的粘合劑圖案(例如,線、正方形或點(diǎn))不可逆地印刷在ibidi Polymer Coverslip的非粘性生物惰性表面上,從而實(shí)現(xiàn)精確控制的細(xì)胞粘附。

 

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  有關(guān)ibidi µ-Patterning技術(shù)產(chǎn)品µ-Pattern Slides更多詳情細(xì)信息,請點(diǎn)擊查看“µ-Patterning technology”

  

  您能確保細(xì)胞在培養(yǎng)過程中以及整個成像過程中都是健康的嗎?

  

  顯微鏡可以做活細(xì)胞和固定細(xì)胞,這取決于實(shí)驗(yàn)設(shè)置和所需的讀數(shù)。在活細(xì)胞中,顯微鏡檢查過程會造成壓力。細(xì)胞必須從培養(yǎng)箱中取出,這導(dǎo)致周圍溫度和濕度的降低。此外,細(xì)胞暴露在光下一段時間,這可能會導(dǎo)致光毒性。一般來說,所有的顯微鏡步驟都應(yīng)該盡可能快地進(jìn)行,同時保持精度,以最大限度地減少細(xì)胞壓力。

  

  因此,任何成像實(shí)驗(yàn)都只能使用有活力和健康的細(xì)胞。為了確保這一點(diǎn),應(yīng)每天在顯微鏡下控制細(xì)胞附著、形態(tài)、融合、營養(yǎng)供應(yīng)和污染跡象。此外,一些參數(shù),如溫度和濕度,必須保持一致。

 

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人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)在µ-Slide 4孔中的免疫熒光

  

  您能確保您選擇的顯微鏡技術(shù)的光學(xué)要求得到滿足嗎?

  

  每種顯微鏡技術(shù)對底材和細(xì)胞預(yù)處理都有自己的特殊要求,在計劃實(shí)驗(yàn)時應(yīng)考慮這些要求。有關(guān)不同襯底的光學(xué)參數(shù)的更詳細(xì)信息更多詳情細(xì)信息,請點(diǎn)擊查看"Microscopy Parameters of Materials" and "Comparison of Material Specifications".

  

  此外,在開始顯微鏡檢查之前,有一些一般的建議:

  

  ·為了防止在容器內(nèi)形成氣泡,所有介質(zhì)都應(yīng)保持平衡。通通過最小化溫差,可以避免可能嚴(yán)重干擾顯微鏡的外部對流。

  

  ·在進(jìn)行熒光顯微鏡檢查時,最大限度地減少激發(fā)光引起的細(xì)胞應(yīng)激尤為重要,因?yàn)檫@可能會改變實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。

  

  ·此外,細(xì)胞培養(yǎng)血管或培養(yǎng)基的自發(fā)熒光可能是不想要的副作用。因此,熒光顯微鏡應(yīng)該應(yīng)用具有低自發(fā)熒光的專門細(xì)胞培養(yǎng)容器。

  

  ibidi的解決方案

  

  許多顯微鏡技術(shù),如相位對比、寬場熒光和共聚焦顯微鏡,都可以不受限制地使用任何具有ibidi Polymer Coverslip聚合物塑料底和ibidi Glass Coverslip玻璃底的ibidi實(shí)驗(yàn)器皿。

 

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  當(dāng)計劃一個活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)時,您的設(shè)置是否滿足所有必要的要求?

  

  如果連續(xù)或在特定時間點(diǎn)需要多個圖像,那么活細(xì)胞成像可能是您的最佳選擇。為了在活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)中保持細(xì)胞的存活和健康,必須在顯微鏡上建立和維持生理?xiàng)l件——與培養(yǎng)箱內(nèi)的設(shè)置相同。

 

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  ibidi的解決方案

  

  ibidi Stage Top Incubation Systems 孵育系統(tǒng)可用于載玻片/培養(yǎng)皿和多孔板。它允許在任何倒置顯微鏡上進(jìn)行短期和長期分析期間準(zhǔn)確可靠地控制重要的活細(xì)胞成像參數(shù)(溫度、CO2和O2濃度以及相對濕度)。如果需要額外控制氧氣水平(例如,在缺氧實(shí)驗(yàn)中),ibidi Stage Top Incubation Systems, CO2/O2 孵育系統(tǒng)是理想的解決方案。

 

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