date:2023-08-17 14:21:38
ibidi Chemotaxis 2D and 3D細(xì)胞趨化載玻片
可視2D/3D細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)流程：
開始實(shí)驗(yàn)前
必要設(shè)備
基本要求：
倒置相差顯微鏡（推薦5倍或10倍物鏡）
用于延時(shí)圖像采集的相機(jī)
Stage Top培養(yǎng)箱（大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞類型需要）
推薦擴(kuò)展：
用于并行圖像采集的電動載物臺
自動對焦
1.樣品制備
步驟
使用ibidi µ-Slide Chemotaxis細(xì)胞趨化載玻片，可以進(jìn)行具有定義的趨化梯度的可重現(xiàn)的趨化性測定。
首先，細(xì)胞接種，這可以在2D或3D環(huán)境中完成。孵育和細(xì)胞附著后，根據(jù)確定的加載方案，用趨化劑填充滿每個(gè)腔室的兩個(gè)儲液池。
ibidi 的解決方案
µ-Slide Chemotaxis 包含3個(gè)獨(dú)立的腔室，用于使用緩慢或快速遷移的細(xì)胞進(jìn)行平行趨化性測定。
它允許在可重現(xiàn)的環(huán)境中創(chuàng)建精確定義的、穩(wěn)定的趨化梯度。
2.活細(xì)胞成像
步驟
生理?xiàng)l件下的活細(xì)胞成像能夠詳細(xì)記錄細(xì)胞隨時(shí)間的遷移，這是正確分析趨化性測定所必需的過程。
成像周期的持續(xù)時(shí)間取決于細(xì)胞類型（例如，快速遷移的白細(xì)胞或緩慢遷移的腫瘤細(xì)胞或成纖維細(xì)胞）和環(huán)境條件（例如，趨化劑的類型和濃度）。用于緩慢遷移細(xì)胞的典型視頻顯微鏡設(shè)置包括在24小時(shí)內(nèi)每 2.5-10分鐘拍攝一張照片。
由于每個(gè)實(shí)驗(yàn)最佳地包含來自20-40個(gè)單細(xì)胞的跟蹤數(shù)據(jù)，因此應(yīng)使用低倍顯微鏡物鏡，例如4倍或10倍。
MDA-MB-231 人乳腺癌細(xì)胞在膠原凝膠中遷移的延時(shí)顯微成像。在 µ-Slide Chemotaxis 中以 EGF 作為趨化劑觀察細(xì)胞 24小時(shí)。生理?xiàng)l件由ibidi加熱和氣體培養(yǎng)系統(tǒng)維持。
ibidi的解決方案
ibidi Stage Top Incubators ibidi加熱和氣體培養(yǎng)系統(tǒng)提供顯微鏡下的生理環(huán)境，可在短期和長期趨化性測定期間實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞成像。
3.細(xì)胞追蹤
步驟
通常趨化性測定的活細(xì)胞顯微鏡檢查會創(chuàng)建時(shí)間圖像堆棧，其中每個(gè)圖像顯示特定時(shí)間點(diǎn)的確切細(xì)胞位置。
為了量化它們的運(yùn)動，通過確定它們在圖像堆棧的每一幀上的位置來跟蹤單個(gè)細(xì)胞。跟蹤可以手動完成，也可以使用特殊軟件自動完成。之后，每個(gè)跟蹤單元格 (x, y)的位置值可用于每個(gè)時(shí)間點(diǎn)(t)并可以進(jìn)一步分析。
使用ImageJ手動跟蹤插件跟蹤后的細(xì)胞跟蹤可視化。
跟蹤后ImageJ手動跟蹤插件的輸出；具有每個(gè)時(shí)間點(diǎn)（t）的每個(gè)被跟蹤單元（x，y）的位置值的數(shù)據(jù)表。
ibidi的解決方案
自動跟蹤和數(shù)據(jù)分析：
MetaVi Labs的Chemotaxis FastTrack AI Image Analysis圖像分析是一種基于AI的自動圖像分析解決方案，用于趨化性測定?；诰W(wǎng)絡(luò)的軟件將快速而強(qiáng)大的細(xì)胞跟蹤與人工智能 (AI) 相結(jié)合，無需標(biāo)記即可進(jìn)行客觀且可重復(fù)的分析。只需將您的數(shù)據(jù)上傳到您的FastTrack AI帳戶，即可開始分析工作。在1到2小時(shí)內(nèi)，您將收到一份詳細(xì)的報(bào)告供下載和進(jìn)一步評估。
手動跟蹤：
ImageJ手動跟蹤插件有助于在趨化性測定中手動跟蹤細(xì)胞遷移。
4.數(shù)據(jù)分析
趨化性測定數(shù)據(jù)分析步驟：
* 數(shù)據(jù)繪圖
* 定量與統(tǒng)計(jì)分析
* 數(shù)據(jù)解釋
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